生物有機(jī)肥料中糞大腸菌群數(shù)的國(guó)標(biāo)測(cè)定方法
糞大腸菌群數(shù)的測(cè)定
（1）樣品稀釋
在無(wú)菌操作下稱取樣品10g或吸取樣品10ml，加入到帶玻璃珠的90ml無(wú)菌水中，置于搖床上200r/min充分震蕩30min，即成10-1稀釋液。
（2）乳糖發(fā)酵試驗(yàn)
選取三個(gè)連續(xù)適宜稀釋液，分別吸取不同稀釋液1ml加入到乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，每一稀釋度接種3支發(fā)酵管，置44.5攝氏度恒溫水浴或隔水式培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)24小時(shí)。如果所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣不產(chǎn)酸，則為糞大腸菌群陰性，如果有產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只有產(chǎn)酸的發(fā)酵管，則按分離培養(yǎng)步驟進(jìn)行。
（3）分離培養(yǎng)
從產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸的發(fā)酵管中分別挑取發(fā)酵液在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上劃線，置于36攝氏度條件下培養(yǎng)18-24小時(shí)。
（4）證實(shí)試驗(yàn)
從（3）中分離平板上挑取可疑菌落，進(jìn)行革蘭氏染色，染色反應(yīng)陽(yáng)性為糞大腸菌群陰性；如果為革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌則挑取同樣菌落接種在乳糖發(fā)酵管中，置44.5攝氏度條件下培養(yǎng)24小時(shí)。觀察產(chǎn)氣情況，不產(chǎn)氣為糞大腸菌群陰性，產(chǎn)氣為糞大腸菌群陽(yáng)性。
（5）結(jié)果
證實(shí)試驗(yàn)為糞大腸菌群陽(yáng)性的，根據(jù)糞大腸菌群陽(yáng)性發(fā)酵管數(shù)，查MPN檢索表，得出每克肥料樣品中的糞大腸菌群數(shù)。
